质粒快速提取试剂盒(1～4mL)

产品货号：

WH0034

中文名称：

质粒快速提取试剂盒(1～4mL)

英文名称：

MicroPlasmid Rapid Extraction Kit(1-4ml)

产品规格：

50次|200次

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本试剂盒对传统的碱裂解法进行了优化，可以在8min内获得高质量质粒DNA。优化的裂解液可以使得离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司新型材料，高效、专一吸附DNA。以下操作步骤适用于提取1～4mL过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

产品特点：

快速：步骤少，操作简单，仅需8min。
高效：可提取菌体85%以上质粒DNA。
配备了独特的IndRed，可以清晰辨明抽提过程中样本的裂解程度，确保得到高效率、高纯度的质粒DNA。

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率	质粒
高拷贝质粒	1～4mL	6～24μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒	1～4mL	3～10μg	pBR322,pACYC及其衍生载体pSC101 及其衍生载体，SuperCos,pWE15

应用实例：

使用本试剂盒和国外A公司的质粒小量提取试剂盒，同时提取质粒DNA，3mL菌液（菌浊度OD600=1.8），洗脱体积50μL，上样量pBS 1μL，pET30a 3μL，pBR322 3μL，琼脂糖凝胶浓度为1%，6V/cm电泳30min。
结果显示，对于不同的质粒，本试剂盒与进口竞品的得率相当。

试剂盒组成：

组分	50T	200T
溶液P1	15mL	60mL
溶液P2	15mL	60mL
溶液P5	20mL	80mL
漂洗液PWT	15mL	50mL
洗脱缓冲液TB	15mL	30mL
RNase A（10mg/ml)	150μL	600μL
IndRed	75μL	300μL
吸附柱CP3	50个	200个
收集管（2mL)	50个	200个

保存条件：室温（15～25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min以溶解沉淀。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月。加入RNase A和IndRed后的溶液P1应置于2～8℃保存，可稳定保存6个月。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)

溶液P1在使用前先加入RNase A和IndRed（将试剂盒中提供的RNase A和IndRed全部加入），混匀，置于2～8℃保存。
使用前请先检查溶液P2和P5是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
注意不要直接接触溶液P2和P5，使用后应立即盖紧盖子。
所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g)。
提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
IndRed的使用：IndRed是一种指示剂，用以指示整个操作的正确性，对人体无害。使用时按照IndRed:溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色；添加溶液P2之后彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色，则说明充分裂解；再添加溶液P5至彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，说明中和复性充分。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PWT中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

取1～4mL过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12000rpm(~13400×g)离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
向留有菌体沉淀的离心管中加入150μL溶液P1（请先检查是否已加入RNase A和IndRed），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
IndRed试剂的加入对于后续PCR、酶切和测序都没有影响。使用时按照IndRed:溶液P1=1:200进行混合，彻底颠倒混匀，混匀后的溶液为澄清的红色。将混匀后的溶液加入到收集好的菌体中彻底混匀，由于菌体的存在，混匀后的溶液为浑浊的红色。
向离心管中加入150μL溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
由于使用了IndRed，添加溶液P2彻底混匀后，溶液的颜色为澄清的紫色。如果在紫色中混杂有浑浊的红色，则说明裂解不充分，继续混匀直至溶液颜色完全变为澄清的紫色。
向离心管中加入350μL溶液P5，立即快速地上下颠倒混匀12～20次，充分混匀，此时将出现絮状沉淀。12000rpm (~13400×g)离心2min。
注意：加入溶液P5后应立即混合，应快速上下颠倒混匀，避免产生局部沉淀。上清中含有少量微小白色沉淀对后续实验没有任何影响。如果上清中存在大量微小白色沉淀，可再次离心后取上清。由于使用了IndRed，添加溶液P5彻底混匀后，溶液为澄清的黄色，如果在黄色中混有紫色，则说明复性不充分，继续混匀至溶液颜色完全变为澄清的黄色。
将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。12000rpm (~13400×g)离心30sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
向吸附柱CP3中加入300μL漂洗液PWT（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm(~13400×g)离心30sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
将吸附柱CP3放入收集管中,12000rpm (~13400×g)离心1min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50～100μL洗脱缓冲液TB，12000rpm (~13400×g)离心30sec将质粒溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。

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